产品信息
细胞名称：K562/Daunorubicin_人白血病柔红霉素耐药细胞
种属来源：人源
性别年龄：女，53岁
种属来源：骨髓
生长特性：悬浮生长
细胞形态：淋巴母细胞
细胞规格：1 X 106cells/T25或1 mL冻存管
培养条件：RPMI1640 Medium + 10%FBS + Daunorubicin
冻存条件：90% FBS + 10% DMSO
传代方法：1:3传代, 2-3天传1代
RIF： >10
细胞培养操作
干冰运输：收到细胞后需立即转入液氮保存、或者-80°C冰箱短期冻存、或者直接复苏
常温运输：收到细胞后，请立即将细胞培养瓶从包装盒中取出，并按照下方操作步骤进行培养传代
细胞传代：细胞密度达80% - 90%，即可进行传代培养
培养瓶中细胞操作步骤
对于悬浮培养的细胞，寄送前，我们会将培养基充满整个培养瓶，以减少产品运输过程中细胞所受震荡。
1. 收到细胞产品后，请注意观察是否有污染。将培养瓶置于倒置显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染。
2. 将培养瓶竖直放置于37℃培养箱中直至温度平衡，随后，在生物安全柜中，转移培养瓶中的细胞至离心管中，离心200×g / 5 -10 min，去除上清后，用5mL培养基吹散细胞。
3. 对上述细胞悬液进行细胞计数及活力检测，调整细胞密度至2-3×105 cells/mL，并转移至新的培养瓶中。
4. 将培养瓶竖直放置于含有5% CO2的37℃恒温培养箱中培养。如果细胞达到传代培养的密度，则进行传代培养
冻存管细胞操作步骤
注意： 为保证细胞的高活率，请收到产品后，立即解冻培养。
1. 将冻存管置于37℃ 水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速，大约2分钟。
2. 一旦冻存管中液体融化后，立即取出，采用 70%酒精喷拭冻存管表面。从此步开始，后续操作须在生物安全柜中完成。
3. 将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中， 离心200×g / 5 - 10 min，用真空泵去除含有冻存液的上清。
4. 用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率，请将培养基在37℃水浴预热后使用。
5. 将细胞置于含有5%CO2的37℃恒温培养箱中培养。
悬浮细胞传代培养
悬浮细胞的传代可通过补加或置换新鲜培养基的方式来完成，具体做法如下：
1. 取出少量细胞悬液进行细胞计数及活力检测，当细胞密度达到1.5×106 cells/mL 时，进行细胞传代培养。
2. 取足量细胞加入到盛有新鲜培养基的培养瓶中，将细胞密度维持在5×105cells/mL。
3. 将培养瓶竖直放置于含有5%CO2的37℃恒温培养箱中培养。如果细胞达到传代培养的密度，则进行传代培养。
培养基换液: 每隔 2 至 3 天。
注意：培养瓶应使用带滤膜瓶盖，以保持培养基中的空气和CO2
注意：耐药细胞，需先无药培养稳定后保种再进行加药培养，按照3次梯度加药：最大剂量1/4，最大剂量1/2，最大剂量。
细胞冻存操作
1. 1000rpm离心5分钟去掉上清。加1 mL血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀， DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1 x 106/mL，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
2. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80°C冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。